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      基因組DNA提取原理及常見問題分析

      發布者:莊盟生物發布時間:2015-04-09瀏覽次數:8439次

      基因組,Genome,一般的定義是單倍體細胞中的全套染色體為一個基因組,或是單倍體細胞中的全部基因為一個基因組。現代遺傳學家認為,基因是DNA(脫氧核糖核酸)分子上具有遺傳效應的特定核苷酸序列的總稱,是具有遺傳效應的DNA分子片段。基因位于染色體上,并在染色體上呈線性排列。基因不僅可以通過復制把遺傳信息傳遞給下一代,還可以使遺傳信息得到表達。不同人種之間頭發、膚色、眼睛、鼻子等不同,是基因差異所致。

      利用基因,人們可以改良果蔬品種,提高農作物的品質,更多的轉基因植物和動物、食品將問世,人類可能在新世紀里培育出超級物作。通過控制人體的生化特性,人類將能夠恢復或修復人體細胞和器官的功能,甚至改變人類的進化過程。

      本公司根據不同樣品來源(如:細菌、酵母、血液、動物組織、動物細胞、植物組織、植物細胞等),制作了多種提取得率高,純度好,簡單方便的試劑盒。

      產品特點

      整個實驗流程不需要昂貴儀器,不需使用酚氯仿等有毒試劑,能夠得到高純度的大片段基因組DNA,操作簡單,可同時處理多個樣品。

      提取得到的基因組DNA可用于各種方向的分子生物學實驗,如:文庫構建、基因圖譜、Sunthern-Blotting、PCR等。

      使用樣品

      細菌、酵母、血液、動物組織、動物細胞、植物組織、植物細胞等,最好使用新鮮樣品,或取樣后迅速將樣品密封,放于-20℃或-70℃保存,注意避免多次凍融樣品,否則將會導致所得基因組DNA的片段變小且提取質量下降。

      基因組DNA提取過程中注意事項:

      1、因為DNA的一級結構是分子生物研究的基礎,所以應盡量保證DNA的完整性。

      2、盡量去除多余雜質,如:蛋白、脂類、多糖、有機溶劑等的污染,以確保下游實驗的順利進行。

      樣品的預處理方式

      植物材料:液氮研磨

      動物材料:勻漿、液氮研磨

      細菌:溶菌酶破壁

      酵母:破壁酶,玻璃珠研磨

      基因組提取常見問題

      ◆ 洗滌后硅膠膜上仍有雜質殘留:

         細胞裂解不充分, 裂解液和樣品要快速充分混勻。

      ◆ 柱子堵塞:

         1.裂解或勻漿處理不徹底。減少樣品使用量,增加裂解液用量,增加勻漿和裂解時間。

         2.處理樣品太多。                              

      ◆ 洗脫產物DNA量很少或沒有:

         1.樣品中細胞或病毒濃度低。

         2.裂解液和樣品混合不均勻造成的細胞裂解不充分。  

         3.蛋白酶K活性下降造成的細胞裂解不充分。      

         4.溫浴時間不夠造成的細胞裂解不充分或蛋白降解不完全,盡量把組織切成小塊,延長溫浴時間,使裂解物中沒有顆粒狀物質殘留。

         5.在上柱前,裂解物中沒加乙醇,或用低濃度乙醇代替無水乙醇。

         6.DNA沒有有效洗脫。提高洗脫效率,可將離心吸附柱加入洗脫液后在室溫靜置至少1 min,再離心。

         7.洗脫液pH不合適,低pH值會減少DNA產率。確保洗脫液pH值在7.0-8.5之間。

         8.洗脫體積太大,超過200μl洗脫體積所得的DNA濃度會降低,但DNA總量不會減少。

      ◆ A260/A280 比值較低:

         用水作為洗脫液時,比值偏低。

      ◆ A260/A280 比值較高:

         大量RNA殘留,沒有使用RNase A,或RNase A活性下降。

      ◆ DNA影響后續酶反應實驗:

         1.在洗脫液中有殘留的漂洗液W1,可通過再次離心去除硅膠膜上的W1。

         2.大量RNA殘留。

      ◆ 緩沖液A、B中有白色沉淀:  

         白色沉淀可能由于低溫或長時間放置產生,可在使用前在56℃重新加熱溶解。

      ◆ 操作中加入緩沖液B有白色沉淀:

         緩沖液B加入后產生的白色沉淀在70℃溫浴時會消失,不會影響下游操作。


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